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細菌發酵罐的取樣與檢測是監控發酵過程、確保產品質量的重要環節,以下是常見的方法:
取樣方法
取樣時機:根據發酵工藝和監測需求確定取樣時間點,一般在發酵前期、中期和后期分別取樣,以了解細菌生長和代謝的不同階段情況。如在對數生長期,可更頻繁地取樣監測生長速率。
取樣工具:使用無菌的取樣器具,如無菌注射器、取樣管等。對于大型發酵罐,可能需要專門設計的取樣裝置,確保取樣過程中不引入雜菌且能代表發酵罐內的整體情況。
取樣操作:取樣前,對發酵罐取樣口進行嚴格的消毒處理,可用酒精棉球擦拭或用蒸汽滅菌。然后,按照無菌操作要求,將取樣器具插入取樣口,抽取適量的發酵液樣品。取樣后,立即將樣品轉移至無菌容器中,并密封好,防止外界微生物污染。
檢測方法
微生物檢測
細胞計數:采用顯微鏡直接計數法或平板菌落計數法。顯微鏡直接計數可快速得到細菌的總數量,但無法區分活菌和死菌;平板菌落計數則是將樣品稀釋后涂布在固體培養基上,培養后計數菌落數,能準確反映活菌數量。
形態觀察:通過革蘭氏染色等方法對細菌進行染色,然后在顯微鏡下觀察其形態、大小、排列方式及染色特性等,初步判斷細菌的種類和生長狀態。
生理生化鑒定:進行一系列生理生化試驗,如糖發酵試驗、氧化酶試驗、過氧化氫酶試驗等,根據細菌對不同底物的利用情況和酶活性特征,進一步鑒定細菌種類。
理化指標檢測
pH 值測定:使用 pH 電極或 pH 試紙測定發酵液的 pH 值,了解發酵過程中酸堿度的變化,pH 值的異常波動可能影響細菌的生長和代謝產物的合成。
溶氧測定:利用溶氧電極測定發酵液中的溶解氧濃度,溶氧是影響好氧細菌生長和代謝的重要因素,通過監測溶氧可優化通氣和攪拌條件。
產物濃度測定:根據發酵產物的不同,采用相應的檢測方法,如高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、分光光度法等,測定目標產物的濃度,以評估發酵過程的效率和產物的產量。
此外,還可以通過檢測發酵液的黏度、電導率等參數,間接了解發酵過程中細菌的生長和代謝情況。同時,為保證檢測結果的準確性和可靠性,需定期對檢測儀器進行校準和維護,并嚴格按照操作規程進行檢測。